Invertebrate Tissue Culture Methods

من کار کشت سلولی حشرات را در سال 1962 آغاز کردم، زمانی که T. D. C. Grace اولین ایجاد خطوط سلولی پیوسته بی مهرگان را گزارش داد. او سلول های در حال رشد را از تخمدان های شفیرگ پروانه صمغ امپراتور، Antheraea euca lypti به دست آورد. در آن زمان سعی می‌کردم سلول‌های در حال رشد را از برگ‌ها به دست بیاورم. روش گریس به دلیل تفاوت در گونه ها، اندازه حشرات و بافتی که باید کشت شود، نمی توانست مستقیماً در فرهنگ من اعمال شود. روش‌های کشت بافت مهره‌داران ایده‌هایی برای آماده‌سازی کشت‌های اولیه از برگ‌ها به من داد، اما آنها نیز نمی‌توانستند مستقیماً مورد استفاده قرار گیرند. هیچ کتاب درسی و دستورالعملی برای کشت بافت بی مهرگان وجود نداشت، بنابراین مجبور شدم خودم روشی را توسعه دهم. ابتدا در نظر گرفتم که چه نوع و چه اندازه عروقی برای کشت بافت حشرات مناسب است. همچنین باید به دنبال مواد مناسب برای ساخت ظروف کشت می گشتم. دوم، من مجبور شدم محیط های کشت مختلف، به ویژه مواد محرک رشد، مانند سرم را بررسی کنم. سپس مجبور شدم رسانه فرهنگ را با آزمون و خطا بهبود دهم. روند راه اندازی فرهنگ اولیه نیز مشکل ساز بود. چگونه می توانم مواد را استریل کنم؟ چگونه می توانم بافت های یک حشره کوچک را جدا کنم؟ برای راه اندازی یک کشت باید چند بافت را جمع آوری کنم؟ باید جواب ها را می یافتم. طبیعتاً زمان زیادی صرف شد.

I started insect cell culture work in 1962, when T. D. C. Grace reported the first establishment of invertebrate continuous cell lines. He obtained grow­ ing cells from pupal ovaries of the emperor gum moth, Antheraea euca­ lypti. At that time, I was trying to obtain growing cells from leafhoppers. Grace's method could not be applied directly to my culture because of the differences in species, the size of the insects, and the tissue to be cul­ tured. The vertebrate tissue culture methods gave me some ideas for pre­ paring cultures from leafhoppers, but those could not be used directly either. There were no textbooks and no manuals for invertebrate tissue culture, so I had to develop a method by myself. First, I considered what type and what size of vessels are suitable for insect tissue culture. Also, I had to look for suitable materials to construct the culture vessels. Sec­ ond, I had to examine various culture media, especially growth-promot­ ing substances, such as sera. Then I had to improve culture media by trial and error. The procedure to set up a primary culture was also a problem. How could I sterilize materials? How could I remove tissues from a tiny insect? How many tissues should I pool in order to set up one culture? I had to find out the answers. Naturally, it took a lot of time.